第二节 放线杆菌属

    放线杆菌属包括：

    1猪胸膜肺炎放线杆菌

    2林氏放线杆菌

    3驹放线杆菌等若干种

    （这三类都很常见）

    猪胸膜肺炎放线杆菌过去列在嗜血杆菌属内，现划入本属，是猪的重要致病菌。

    猪胸膜肺炎放线杆菌

    1本菌旧称猪胸膜肺炎嗜血杆菌或副溶血嗜血杆菌，但 dNA 杂交试验表明，本菌 与林氏放线杆菌有很高同源性，因此自 1983 年起改为现名，并划归放线杆菌属。

    2菌引致猪传染性胸膜肺炎 是集约化猪场常见猪病之一。

    1.生物学性状

    1.1 形态与染色

    1小球杆菌，具多形性→因此以前放在嗜血杆菌。

    2新鲜病料呈两极染色，有荚膜和鞭毛，具运动性。

    1.2 培养及生化特性

    1呼吸类型：本菌属兼性厌氧，置 10% co2可长出黏液性菌落。

    2营养需要（很高）：在普通培养基不长，需添加 V 因子[辅酶1（NAd）或辅酶2（NAdp）]，常用巧克力培养基培养

    3生长表现：

    （1）在绵羊血平板上，可产生稳定的β溶血与巴氏杆菌对比（无溶血，因为都有两极染色现象）。

    （2）金黄色葡萄球菌可增强其溶血圈（cAmp 试验阳性）。

    1.3 血清型

    1根据其荚膜多糖及 LpS 的抗原性差异，目前将本菌分为 15个血清型，其中 1 和 5 型又分为 1a、1b 及 5a、5b 两亚型

    2由于侧链及结构的相似性，某些型之间存在抗原性交叉。

    3血清型的毒力有差异，其中 1、5、9、11 型最强，3、6、10 型毒力稍次，2 型毒力较弱

    4我国以 1、3、4、5、7 型为主

    →不管病毒还是细菌，了解该病一个还是多个血清型，是否有交叉保护，而这个厂到底是哪个血清型

    2.致病性

    1猪是本菌高度专一性的宿主，寄生在猪肺坏死灶内或扁桃体。

    2各种日龄猪都易感染，经空气或猪与猪直接接触传染。应激可促使发病。在集约化猪场的猪群往往是跳跃式急性爆发，死亡率高

    3表现典型的胸膜肺炎，鼻孔流出血性分泌物，其内带菌（受粘液蛋白的保护，可在环境中存活数天）。

    4毒力因子

    毒素是本菌最重要毒力因子，名为 Apx，具有溶细胞作用，是一种穿孔毒素

    补：全进全出非常重要

    有母原抗体保护的本身不易发病，无此保护的易发病。

    新引进的猪与旧猪混合培养，一则让它适应本厂微生物，二则互相验证谁携带病原体。

    3.微生物诊断

    1显微镜检查

    取病死猪肺坏死组织、胸水、鼻及气管渗出物作涂片，显微镜检查是否有 G- 两极染色的球杆菌。

    2分离培养与鉴定

    确诊需取上述病料接种巧克力琼脂或绵羊血琼脂，置5%co2以达 37c越夜培养。如有溶菌小菌落生长，应进一步作 cAmp 试验；检测脲酶活性及甘露醇发酵能力

    →cAmp 无特异性，好多细菌都可以 一般作琼脂扩散试验或直接凝集试验鉴定分离株的血清型

    3基因检测

    预防与治疗

    1采猪群血清作抗体检测，淘汰阳性猪，可建立净化猪群。

    2同时注射灭活疫苗，某些国家已用此法消灭了此病。但此法费用高昂。

    免疫预防应选用当地血清型的分离株，制成灭活疫苗就地使用，效果较佳。

    3根据药敏试验的结果，选用敏感的抗生素可供猪群治疗之用，一般首选青霉素，但美、日等国发现，有 16%的菌株已对青霉素产生耐药性。

    第三节 嗜血杆菌

    1嗜血杆菌是一群酶系统不完全的革兰阴性杆菌，生长需要血液中的生长因子，尤其是 x 因子和 V 因子。常见的动物源嗜血杆菌有 6 种。

    2嗜血杆菌存在于人和动物的呼吸道黏膜常分离自人和动物的各种病灶和分泌物。

    3本属细菌引起的畜禽疫病在世界许多国家发现。

    1.生物学性状

    1.1 形态及染色（目前是依据遗传分类鉴定，而不是形态等）

    1多为短杆状，也有呈球、杆状或长丝状等多形性，大小为 1.5x（0.3~0.4）um。多单个、也有短链排列。

    2无鞭毛，无芽孢，新分离的致病菌株有荚膜。

    3美蓝染色呈两极，革兰染色为阴性。

    1.2 培养特性

    1呼吸类型：

    需氧或兼性厌氧；初次分离培养时供给 5%~10% co2可促进生长

    →怀疑它为嗜血杆菌时加入 xx

    2生长温度：最适生长温度 37c

    3 适宜 ph：7.6~7.8

    4营养要求（很高）

    V 因子：

    （1）为辅酶1或辅酶2[即烟碱腺嘌呤二核苷酸（NAd）或烟碱腺嘌呤二核苷胺磷酸（NAdp）] ，是细菌呼吸过程中其递氢作用的脱氢辅酶。

    （2）热不稳定

    （3）血液中的 V 因子一般处于被抑制状态，血液加热后，抑制物被破坏，V 因子被释出。

    x 因子：

    （1）成分：血红蛋白中的血红素及其衍生物，含铁卟啉。

    （2）热稳定，经 120c 30min 不被破坏。

    巧克力培养基：

    （1）将鲜血琼脂加热 75~80c，5~15min，即制成该培养基

    （2）该过程从细胞内释放了 NAd，同时失活对 NAd 的酶。

    5生长表现：

    （1）本属菌在巧克力琼脂上，经 37c 24~48h 培养，生长的菌落 呈圆形、隆起、表面光滑、边缘整齐、灰白色半透明小菌落。

    （2）菌落大小可因菌种和培养基的营养程度不同而异，从针尖大直至绿豆大小。

    6生化反应：本属菌的生化反应较弱，对糖类发酵多不稳定，氧化酶和硝酸还原酶阳性。

    1.3 抗原及分型

    本属菌有荚膜多糖抗原和菌体结构抗原

    1荚膜抗原成分主要为多糖和磷壁酸，具有型特异性。

    2菌体结构抗原包括脂多糖抗原和外膜蛋白抗原。

    2.致病性

    1本属菌可致人和动物多种疾病。其毒力因子包括荚膜，菌毛和内毒素等，耐过嗜血杆菌所致疫病的畜禽具有较强免疫力，以体液免疫为主。

    2流感嗜血杆菌及副流感嗜血杆菌仅见于人。

    流感嗜血杆菌可致各种呼吸道感染及小儿急性脑膜炎等。

    副流感嗜血杆菌存在正常上呼吸道，可致尿道炎。

    副猪嗜血杆菌（注意）

    （1）引起猪的格氏病，表现为多发性浆膜炎（鸭疫里氏杆菌→雏鸭传染性浆膜炎） 包括心肌炎、腹膜炎、胸膜炎、脑膜炎以及关节炎。

    （2）本菌也常与猪流感病毒联合引起猪流感。

    3不同血清型的毒力情况

    （1）血清型 1、5、10、12、13 和 14 为高毒力致病株（致死）

    （2）血清型 2、4、15 为中等毒力株（多发性浆膜炎，不致死）

    （3）血清型 3、6、7、8、9、11 毒力较低，被证明不能引起临床感染（无临床表现和病变）

    （4）其中又以 5、4、13 最为常见（占临床分离的 70%以上）

    （前几年的数据，而且有些国家不是）

    3.微生物学诊断

    3.1 显微镜检查：

    采取脑脊液（离心沉淀物）、血液、分泌液等病料，涂片，美蓝染色，镜检，呈两极染色。

    3.1 分离培养 ：

    去上述病料直接划线接种于巧克力琼脂和鲜血琼脂平板上，置含5%~10% co2 培养箱，经 37c培养 24~48h，对生长菌落进行鉴定

    →不好培养，现在基本都是去买商品化培养基

    1在血琼脂平板上生长贫瘠或不长，在巧克力琼脂上生长良好，可疑为嗜血杆菌。

    2若在巧克力琼脂上生长良好，同时在鲜血琼脂上生长成小到中等大小溶血菌落，则可疑为溶血性嗜血杆菌。

    3副猪嗜血杆菌等需要更丰富的营养

    在巧克力培养基上也生长缓慢和贫瘠

    3.3 V 因子需要试验

    挑取可疑菌落接种兔鲜血琼脂平板上，再用金黄色葡萄球菌点种或垂直划线，置 5%~10% co2，37c培养 24h。愈靠近金黄色葡萄球菌落生长的本属菌落愈大，愈远的愈小，甚至不见菌落生长，该现象称为“卫星现象”

    →推断题

    3.4 卟啉试验：又称 h 因子需要试验

    3.5 生化试验

    3.6 血清学试验